植物丙二醛测定试剂盒(微板法)

产品货号：

SNM204

中文名称：

植物丙二醛测定试剂盒(微板法)

英文名称：

Plant Malondialdehyde (MDA) assay kit (Colorimetric method)

产品规格：

48T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒可测不同植物的根、茎、叶等样本中丙二醛的含量。

检测原理

过氧化脂质降解产物中的丙二醛（MDA）可与硫代巴比妥酸(TBA)缩合，形成红色产物，在532nm处有最大吸收峰。因底物为硫代巴比妥酸（Thibabituric Acid TBA）所以此法称TBA法。

背景资料

机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。

MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，通过SOD与MDA的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。

产品特点

操作简便：可将试剂混合成单试剂操作，全程约50分钟，可测100例左右样本。
稳定性好：试剂盒2～8℃存放12个月有效，试剂配制后至少能存放6个月；呈色稳定，显色后24小时吸光度不变。
再现性好：批内CV=2.3%，批间CV=5.34%。
回收试验：X =101.8%。
受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
适用于植物样本。

编号	组分	规格	保存
试剂一	澄清剂	3mL×1瓶	室温保存1年
试剂一天冷时会凝固，每次测试前适当水浴加温以加速溶解，直至透明方可应用
试剂二	缓冲液	45mL×1瓶	4℃冷藏1年
试剂三	显色剂	15mL×1瓶	4℃避光冷藏1年
工作液配制：试剂一:试剂二:试剂三＝0.1:3:1，现用现配
试剂四	10nmol/ml标准品	1mL×1瓶	4℃密封冷藏1年
试剂五	贮备液（10倍浓缩）	20mL×1瓶	4℃密封冷藏1年
试剂五应用提取液的配制：试剂五贮备液:双蒸水＝1:9
附赠96孔板×1块；盖子上带孔的离心管60只

酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为532nm）
恒温水浴箱（孵育温度为95℃以上）
台式离心机
漩涡混匀器
微量移液器

按步骤加入样本和试剂
漩涡混匀，95℃以上沸水浴40分钟，流水冷却，然后3500~4000转/分，离心10分钟，取上清待测
532nm波长，1cm光径，比色测定各管吸光度值
注：取样量一般为0.1～0.2mL（样本量够直接取0.2mL测定）

样本前处理：准确称取植物组织重量，按重量体积比1：9加入9倍体积的试剂五应用提取液（如0.1g植物组织+0.9mL的试剂五应用提取液），剪碎后用内切式匀浆机冰水浴匀浆，8000～10000转/分，每次10～15秒，间歇30秒，共3～5次，再将匀浆吸入到离心管中，3500～4000转/分，离心10分钟，取上清待测。
编号：对赠送给你的盖子上带孔的离心管进行编号，并用它加样加试剂进行操作
操作表：
成分空白管标准管测定管
无水乙醇（μl） 50
10nmol/ml标准品(μl) 50
待测样本（μl） 50
工作液（μl） 1000 1000 1000

盖上盖，旋涡混匀器混匀，95℃以上水浴20分钟，取出后流水冷却，530nm，将酶标板空板进行扫描，准确吸取0.25mL各管反应液加入到新的96孔板中，酶标仪测定各孔吸光度（计算时要减去空板读数）。

部分样本中MDA含量较低，可将操作表中的空白管、标准管、测定管的取样量均加大到100μL进行测定。
附送盖子上带孔的EP管60个，直接编号后用于操作。
水浴时间及温度要固定，反应时间到后立即用流水冷却。冷却后呈色稳定，12小时内吸光度基本不变。
沸水浴20分钟，流水冷却后，转入96孔板中的液体量一定要准确，并且不能有气泡。如有气泡可以放一些时间等气泡消失后再测。（最好先将酶标板空板进行扫描）
如没有酶标仪，可以用微量比色皿在分光光度计上进行测定。

MDA含量 (nmol/g)	＝	测定OD值－空白OD值	×	标准品浓度 (10nmol/mL)	÷	样本浓度 (g/mL)
		标准OD值－空白OD值

注：样本浓度＝植物组织重(g)/所加提取液的总量(mL)

计算举例

例1．准确称取青菜叶片0.1g，加入0.9mL的试剂五应用提取液，制备成10%的匀浆液，3500转/分离心，取上清液0.05mL，按上述操作表进行测定，测得空白管吸光度0.006，标准管吸光度0.100，测定管吸光度0.054，则计算如下：

MDA含量 (nmol/g)	＝	测定OD值－空白OD值		×	标准品浓度 (10nmol/mL)	÷	样本浓度 (g/mL)
		标准OD值－空白OD值
	＝	0.054－0.006	×10÷	0.1
		0.100－0.006		0.9
	＝	45.957nmol/g

例2．准确称取茄子0.1g，剪碎后加入0.9mL的试剂五应用提取液，制备成10%的匀浆液，3500转/分离心，取上清液0.05mL，按上述操作表进行操作，测得空白管吸光度0.006，标准管吸光度0.100，测定管吸光度0.029，则计算如下：

MDA含量 (nmol/g)	＝	测定OD值－空白OD值		×	标准品浓度 (10nmol/mL)	÷	样本浓度 (g/mL)
		标准OD值－空白OD值
	＝	0.059－0.006	×10÷	0.1
		0.100－0.006		0.9
	＝	50.745nmol/g

例3．准确称取黄瓜0.1g，剪碎后加入0.9mL的试剂五应用提取液，制备成10%的匀浆液，3500转/分离心，取上清液0.05mL，按上述操作表进行操作，测得空白管吸光度0.006，标准管吸光度0.100，测定管吸光度0.029，则计算如下：

MDA含量 (nmol/g)	＝	测定OD值－空白OD值		×	标准品浓度 (10nmol/mL)	÷	样本浓度 (g/mL)
		标准OD值－空白OD值
	＝	0.029－0.006	×10÷	0.1
		0.100－0.006		0.9
	＝	22.021nmol/g

例4．准确称取胡萝卜0.1g，剪碎后加入0.9mL的试剂五应用提取液，制备成10%的匀浆液，3500转/分离心，取上清液0.05mL，按上述操作表进行操作，测得空白管吸光度0.006，标准管吸光度0.100，测定管吸光度0.016，则计算如下：

MDA含量 (nmol/g)	＝	测定OD值－空白OD值		×	标准品浓度 (10nmol/mL)	÷	样本浓度 (g/mL)
		标准OD值－空白OD值
	＝	0.016－0.006	×10÷	0.1
		0.100－0.006		0.9
	＝	9.574nmol/g

例5．准确称取青椒0.1g，剪碎后加入0.9mL的试剂五应用提取液，制备成10%的匀浆液，3500转/分离心，取上清液0.05mL，按上述操作表进行操作，测得空白管吸光度0.006，标准管吸光度0.100，测定管吸光度0.026，则计算如下：

MDA含量 (nmol/g)	＝	测定OD值－空白OD值		×	标准品浓度 (10nmol/mL)	÷	样本浓度 (g/mL)
		标准OD值－空白OD值
	＝	0.026－0.006	×10÷	0.1
		0.100－0.006		0.9
	＝	19.149nmol/g

例6．准确称取土豆0.1g，剪碎后加入0.9mL的试剂五应用提取液，制备成10%的匀浆液，3500转/分离心，取上清液0.05mL，按上述操作表进行操作，测得空白管吸光度0.006，标准管吸光度0.100，测定管吸光度0.028，则计算如下：

MDA含量 (nmol/g)	＝	测定OD值－空白OD值		×	标准品浓度 (10nmol/mL)	÷	样本浓度 (g/mL)
		标准OD值－空白OD值
	＝	0.028－0.006	×10÷	0.1
		0.100－0.006		0.9
	＝	21.064nmol/g

成分	空白管	标准管	测定管
无水乙醇（μl）	50
10nmol/ml标准品(μl)		50
待测样本（μl）			50
工作液（μl）	1000	1000	1000

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